色譜峰之間怎樣才算達(dá)到分離？首先是兩個(gè)色譜峰的峰間距必須相差足夠大，若兩峰間僅有一定距離，而每一個(gè)峰卻

很寬，致使彼此重疊，則兩組分仍無法分離；第二是峰寬必須窄；只有同時(shí)滿足這兩個(gè)條件時(shí)，兩組分才能分離。

　　判斷相鄰兩組分在色譜柱中的分離情況，常用分離度R作為色譜柱的分離效能指標(biāo)。R定義為相鄰兩組分色譜峰保留值

之差與兩個(gè)色譜峰峰底寬度總和之半的比值。R值越大，意味著相鄰兩組分分離得越好。

　　因此，分離度R是柱效能、選擇性影響因素的總和，可用其作為色譜柱的總分離效能指標(biāo)。從理論上可以證明，若峰

形對(duì)稱且滿足于正態(tài)分布，當(dāng)R<>時(shí)，兩峰有明顯的重疊；R=1時(shí)，分離程度可達(dá)95%，；當(dāng)R=1.5時(shí)，分離程度可達(dá)

99.7%，因而可用R=1.5來作為相鄰兩峰已分離的標(biāo)志。

化合物出峰重疊的主要原因：

        ①載氣流速過快；

　?、谏V柱溫度過高；

　　③進(jìn)樣量過大；

　?、軞饣覝囟绕?；

　　⑤進(jìn)樣時(shí)未選擇合適的分流比分流；

　?、奚V柱長不夠，導(dǎo)致分離度不夠；

　?、呱V柱型號(hào)選用不對(duì)。

解決方案：

      ①載氣類型和流速的選擇

　　首先要根據(jù)考慮使用的檢測(cè)器類型選擇合適載氣。熱導(dǎo)池檢測(cè)器TCD常選用氫或氦氣作載氣，能提高靈敏度，氫載氣

還能延長熱敏元件鎢絲的壽命；氫火焰檢測(cè)器FID用氮?dú)庾鬏d氣，也可用氫氣；電子捕獲檢測(cè)器ECD常用氮?dú)?；火焰光度檢

測(cè)器FPD常用氮?dú)夂蜌錃狻?/p>

　載氣成分越輕、純度越高，越有利于提高分離度。當(dāng)然，現(xiàn)在的儀器都是固定采用某一種載氣，一般不常更換載氣種類。

　　載氣流速對(duì)柱效率和分析速度都會(huì)產(chǎn)生影響。根據(jù)范氏方程，載氣流速快，能加快分析速度，減少分子擴(kuò)散，縮短分

析時(shí)間，但同時(shí)可能降低分離度；載氣流速慢有利于傳質(zhì)，一般可提高分離度，同時(shí)也可能會(huì)造成峰展寬而降低分離度。

所以當(dāng)多個(gè)化合物峰重疊時(shí)，應(yīng)選擇合適的載氣流速。根據(jù)范氏方程，一定的色譜柱對(duì)一定的化合物有一個(gè)流速點(diǎn)，

這時(shí)候柱效，分離能力，但是人們常用“實(shí)用流速”即合適的載氣流速。

　　②柱溫的選擇

　　柱溫直接影響分離效能和分析速度。柱溫低有利于分配，有利于組分分離，但溫度過低會(huì)造成被測(cè)組分在柱上冷凝或

傳質(zhì)阻力增加，使色譜峰擴(kuò)張甚至拖尾；柱溫高有利于傳質(zhì)，但會(huì)使分配系數(shù)變小，不利于分離。對(duì)沸點(diǎn)范圍寬、組成復(fù)

雜的混合物應(yīng)利用色譜柱的程序升溫技術(shù)，獲得分離度、最短分析時(shí)間的分析結(jié)果。

　　③色譜柱的選擇

　　色譜柱的選擇是整個(gè)色譜分析條件優(yōu)化過程中最重要的一環(huán)。色譜柱選擇是否恰當(dāng)直接決定了分析結(jié)果的準(zhǔn)確性、

數(shù)據(jù)的重現(xiàn)性、峰形的美觀等。

　　毛細(xì)管色譜柱參數(shù)主要包括：固定液極性、柱長、內(nèi)徑、膜厚等四方面。選擇色譜柱應(yīng)根據(jù)“相似相溶”原理，分析

非極性物質(zhì)用非極性色譜柱，極性物質(zhì)用極性色譜柱。根據(jù)固定液極性強(qiáng)弱可以分非極性柱（DB-1或等同的其它品牌）

、弱極性柱（DB-5等）、中等極性柱（DB-17等）、強(qiáng)極性柱（DB-WAX等）。

　　色譜柱中固定液用量對(duì)分離起決定作用。一般來說，載體表面積越大，固定液用量可以越高，允許的進(jìn)樣量也就

越多。為了改善液相傳質(zhì)，應(yīng)使液膜薄一些，固定液液膜薄，柱效能提高，可縮短分析時(shí)間；但是膜厚是一個(gè)選擇空間

比較大的參數(shù)，膜厚越厚，對(duì)分析物的保留會(huì)增加，保留時(shí)間增大，有助于分離；但是由于傳質(zhì)阻力的增加，柱效又會(huì)

降低。因此，如果分析保留弱的物質(zhì)(如一些小分子)，可考慮試試厚液膜的柱子，反之則選擇薄液膜的色譜柱。

　　對(duì)填充柱來說，要求載體表面積大，表面孔徑分布均勻。固定液涂在載體表面上成為均勻薄膜，液相傳質(zhì)就快，

柱效就可提高；載體粒度均勻、細(xì)小，也有利于柱效提高；但粒度過小，柱壓增大，對(duì)操作不利。柱長對(duì)分離的影響也

很明顯。通常色譜柱越長，理論塔板數(shù)越大，分理效果越好，但是保留時(shí)間增加也很明顯。對(duì)于特別難分離的物質(zhì)，

一般應(yīng)選用長柱。內(nèi)徑對(duì)柱容量和柱效亦有較大影響，內(nèi)徑越小，柱容量會(huì)下降，但柱效會(huì)變高。

　　④進(jìn)樣時(shí)間和進(jìn)樣量

　　手動(dòng)進(jìn)樣時(shí)速度必須快，一般應(yīng)在1s之內(nèi)。進(jìn)樣時(shí)間過長，會(huì)造成峰展寬、前伸或拖尾變形。進(jìn)樣量一般液體0.1-5μL

，氣體0.1-10mL。進(jìn)樣太多，會(huì)使色譜峰展寬，造成前伸、拖尾或重疊而分離不好。

　　⑤氣化室溫度的選擇

　　合適的氣化室溫度既能保證樣品組分瞬間氣化，又不引起樣品分解。氣化室溫度一般比柱溫高30-70℃或比樣品

組分中沸點(diǎn)高30-50℃。在保證不發(fā)生熱分解時(shí)，適當(dāng)提高氣化溫度對(duì)分離及定量均有利。

色譜柱失效：

故障原因：

   瓦里安氣相GC450，自動(dòng)進(jìn)樣器，ECD與PFPD檢測(cè)器。DB-1701（30m×0.25mm×0.25μm），

VF-1ms（30m×0.32mm×0.25μm）色譜柱。

    DB1701色譜柱購買于2012年12月，做蔬菜中有機(jī)磷的檢測(cè)，已使用兩年零八個(gè)月，每年做近四百個(gè)樣品，總共做

樣品近千個(gè)，在剛做完的80個(gè)樣品后，進(jìn)19種有機(jī)磷標(biāo)液，峰形難看且出峰很少，進(jìn)10種有機(jī)磷只出四個(gè)峰，看來是

柱效下降，又配毒死蜱與標(biāo)液進(jìn)樣，正常情況兩個(gè)峰相離很近，但能分離，現(xiàn)在只出一個(gè)峰，可見柱子的

分離度也不行。

采取措施：

換新襯管，老化色譜柱，卸下檢測(cè)器端，以5℃/min的速率進(jìn)行老化過夜，重新進(jìn)以上兩種不同標(biāo)液，19種、10種標(biāo)液出

峰情況與上面一樣，無多大效果，將色譜柱兩端各截去1.5米，安好進(jìn)樣，仍然是上面的情況。會(huì)不會(huì)是氣相條件影響柱效

，換一根新購買的DB1701柱，相同的標(biāo)液小瓶，相同的氣相條件，看出峰情況。

從結(jié)果看，用新DB1701柱子，以上三種標(biāo)液出峰峰形尖銳，分離度好，由此判斷2012年的DB1701柱已經(jīng)失效，該扔掉了。

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